尼达尼布(nintedanib)是否会干扰成肌细胞分化-

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摘要

当PDGF-AA加入培养基时,尼达尼布对细胞迁移的影响大,且呈剂量依赖性。Transwell实验证实了这些结果,表明尼达尼布减少了PDGF-AA的迁移效应。

  尼达尼布(nintedanib)减少了人类成纤维细胞的增殖、迁移和纤维化标志物的mRNA表达

  在肌肉营养不良中,活化的成纤维细胞增殖并表达高水平的细胞外蛋白,导致纤维化组织的扩张e27,28。我们分析了尼达尼布(nintedanib)是否可以在体外减少成纤维细胞增殖。尼达尼布(nintedanib)显著减少纤维母细胞增殖剂量依赖性的方法高达高的效果使用的浓度为0.4μM没有任何细胞毒性效应衡量细胞生存和凋亡化验(无花果。S1A,B)。因此,基因的表达PT53(肿瘤蛋白质p53)和ki-67+细胞的数量,这是大家都知道的细胞周期标记,在尼达尼布(nintedanib)-treated细胞明显低于控制摘要细胞。为了研究尼达尼布(nintedanib)靶向的生长因子讯号级联对成纤维细胞增殖的影响,我们在重组PDGF-AA、重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)或重组人血管内皮生长因子(VEGF)-A存在的情况下培养了人成纤维细胞,是否存在尼达尼布(nintedanib)。为了避免可能干扰胎牛血清(FBS)中存在的其他生长因子,我们仅用1%胎牛血清培养细胞。PDGF-AA在第2、4、6天显著延长成纤维细胞增殖,但bFGF和VEGF没有。在0.4°M时添加尼达尼布(nintedanib)完全阻断了这种延长。

  在肌肉损伤后,被激活的成纤维细胞获得迁移能力,使它们可以迁移到损伤部位。通过划痕实验,我们观察到尼达尼布(nintedanib)阻断了PDGF-AA、bFGF、VEGF和胶原组织生长因子(CTGF)促进的细胞迁移。当PDGF-AA加入培养基时,尼达尼布(nintedanib)对细胞迁移的影响大,且呈剂量依赖性。Transwell实验证实了这些结果,表明尼达尼布(nintedanib)减少了PDGF-AA的迁移效应。此外,尼达尼布(nintedanib)恢复明显PDGF-AA的影响基因的表达与细胞迁移等ADAM-17(亚当metallopeptidase域17),TIMP-1(金属蛋白酶组织抑制剂1),和TIMP-2(金属蛋白酶2组织抑制剂)。在ADAM-12(ADAMmetallopeptidasedomain12)、MMP1(metalloproteinase1)、MMP2(metalloproteinase2)和MMP9(metalloproteinase9)中未发现显著差异。为了了解尼达尼布(nintedanib)医治是否在体外改变了骨骼肌成纤维细胞的mRNA表达,我们在培养4天后使用实时PCR分析了与
尼达尼布(nintedanib)是否会干扰成肌细胞分化-
肌肉纤维化相关基因的表达。我们观察到,尼达尼布(nintedanib)在0.4蛋白水平显著减少COL1A1(I型-1胶原链)、COL3A1(III型-1胶原链)、FN1(纤连蛋白1)、CTGF(结缔组织生长因子)、PDGFA(血小板衍生生长因子A)和TGFB1(转化生长因子1)的表达。相反,我们没有观察到ACTA-2(肌动蛋白、-2、平滑肌、主动脉)和PDGF-B(血小板衍生生长因子B)的表达有显著差异。

  尼达尼布(nintedanib)对离体成肌细胞向肌管分化无影响

  为了分析尼达尼布(nintedanib)是否会干扰成肌细胞分化,我们在分化培养基中延长尼达尼布(nintedanib)的剂量培养了融合的人成肌细胞7天。对照组和尼达尼布(nintedanib)处置组之间的肌管分化指数无差异。此外,我们没有发现差异分化成肌细胞培养在指数中包含PDGF-AAb-FGF,或VEGF-A有或没有尼达尼布(nintedanib)。我们还研究了肌管是否接受尼达尼布(nintedanib)更耐化学损伤使用0.25毫米十二烷基硫酸钠(SDS),我们没有看到一个尼达尼布(nintedanib)对肌纤维膜修复的影响。

  尼达尼布(nintedanib)医治改善了mdx小鼠的电生理测试

  我们给10个月大的mdx小鼠(n=7)以60毫克/kg/day的剂量口服尼达尼布(nintedanib)(从现如今起,尼达尼布(nintedanib)医治的mdx小鼠)1个月,并与10个月大的未医治的mdx小鼠(从现如今起,mdx小鼠;10月龄C57野生型小鼠(从现如今开始为野生型小鼠;n=5)。我们首先进行了一个电子步态分析,这允许识别在行走模式的差异健康和营养不良的小鼠。我们没有发现WT小鼠、mdx小鼠和nintedani处置的mdx小鼠之间的差异,这表明在这个年龄的小鼠模型中,涉及爪子肌肉的虚弱阶段不足以发现使用该技术的差异。

  然后,我们使用电生理测试分析复合肌肉动作电位振幅城市规划机构(CMAP)和形态学的运动单位动作电位(MUAPs)。我们检查到,与mdx小鼠相比,尼达尼布(nintedanib)医治的mdx小鼠胫骨前肌处腓骨神经的CMAP有统计学上显著的延长。此外,我们还发现如今腓肠肌(GM)和足底肌中记录到的CMAPs呈非显著延长趋势。我们没有发现潜伏期或传导速度的变化。肌电图显示在胫前肌的骨套的形态有明显的改变。WT肌肉含有类似的中小型MUAPs比例,而mdx老鼠小MUAPs为主。经尼达尼布(nintedanib)处置的mdx小鼠的分析显示,与mdx小鼠相比,小套膜的比例显著下降,中、大套膜的比例升高,这具有统计学意义。

  尼达尼布(nintedanib)医治可降低mdx小鼠的肌肉纤维化

  医治1个月后的肌肉组织学分析显示,nintedani处置和未处置mdx小鼠之间存在显著差异,且对动物肌肉细胞凋亡没有任何影响。我们分析了膈肌,据报道膈肌是mdx小鼠31中受影响严重的肌肉,以及WT、mdx小鼠和接受尼达尼布(nintedanib)医治的mdx小鼠的四头肌和胫前肌。在mdx小鼠和尼达尼布(nintedanib)处置的mdx小鼠之间,Hematoxilin-eosin染色显示肌肉纤维的大小或中央有核纤维的比例均无差异。由于尼达尼布(nintedanib)阻断VEGF受体,我们还分析了肌肉血管化。

  虽然我们没有发现三组小鼠中每纤维中cd31阳性血管的比例有差异,但尼达尼布(nintedanib)医治倾向于逆转mdx小鼠中观察到的血管/肌肉纤维比例的延长。为了研究尼达尼布(nintedanib)在肌肉中的作用,我们量化了emhc阳性肌肉纤维的数量,这是肌肉再生的初期标志。我们观察到的肌肉纤维数量降低表达eMHC尼达尼布(nintedanib)-treatedmdx小鼠相比mdx老鼠。然后,我们分析了该地区的骨骼肌纤维组织中胶原蛋白量化VI表达式,我们观察到显著降低胶原蛋白VI地区隔膜(−5.6%),股四头肌(−8.4%)和胫骨前肌(−4.1%)的尼达尼布(nintedanib)-treatedmdx老鼠相比mdx老鼠。

  mRNA表达的细胞外基质蛋白质Col1a1Col3a1,Fn1,生长因子Pdgfa,Pdgfb,Ctgf,Tgfb1,和Adgre1F4/80(附着力Gprotein-coupled受体E1)编码,一种蛋白质表达的小鼠巨噬细胞的数量,显著提高或延长趋势在mdx老鼠与WT老鼠相比。Col1a1的mRNA表达,Col3a,Tgfb1,Pdgfa,和Pdgfb股四头肌,隔膜,与mdx小鼠相比,尼达尼布(nintedanib)医治的mdx小鼠的胫骨前肌降低。与mdx小鼠相比,尼达尼布(nintedanib)减少了尼达尼布(nintedanib)医治的mdx小鼠胫前肌和四头肌Adgre1mRNA的表达。令人惊讶的是,尼达尼布(nintedanib)显著延长了mdx小鼠胫骨前肌的Ctgf。在其他肌肉中也发现了类似的趋势。

  尼达尼布(nintedanib)对mdx小鼠心脏纤维化的影响

  我们定量了WT、mdx小鼠和nintedani处置的mdx小鼠心脏切片中VI胶原和III胶原的含量。在WT和未处置mdx小鼠之间,我们没有观察到胶原蛋白阳性区域的显著差异。相比之下,在mdx小鼠中III型胶原延长,但尼达尼布(nintedanib)未对其进行修饰。然而,与未处置mdx相比,基因表达显示,经尼达尼布(nintedanib)处置的mdx小鼠Col3a1mRNA表达显著下降。同时研究了Col1a1、Fn1、Pdgfa、Pdgfb、Ctgf、Tgfb1和Adgre1的mRNA表达情况。我们只观察到尼达尼布(nintedanib)处置后Adgre1基因表达下降。尼达尼布(nintedanib)一瓶好多钱?一瓶有多少颗呢?是好多毫克的?详情请扫码咨询:

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