尼达尼布(nintedanib)抑制VEGF诱导的肺MVEC增殖-

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摘要

为了评估尼达尼布的最小有效剂量,我们研究了不同浓度的尼达尼布对VEGF刺激下Erk1/2磷酸化的抑制作用,Erk1/2是参与VEGF驱动内皮细胞增殖的下游靶点。

  为了评估尼达尼布(nintedanib)的最小有效剂量,我们研究了不同浓度的尼达尼布(nintedanib)对VEGF刺激下Erk1/2磷酸化的抑制作用,Erk1/2是参与VEGF驱动内皮细胞增殖的下游靶点。尼达尼布(nintedanib)在对照组MVECs中以浓度依赖的方法抑制vegf诱导的pErk1/2(P=0.005)。在0.3°M(浓度不会导致形态变化),20个pErk1/2水平与非刺激条件相似(P=0.02)。这个浓度用于所有后续实验。通过EdU掺入评估,vegf诱导的对照MVECs增殖被尼达尼布(nintedanib)减少(P=0.02)。尼达尼布(nintedanib)抑制VEGF刺激PAHMVECERK1/2磷酸化,但对PAH患病者源性MVEC增殖无显著影响(P=0.15)。

  尼达尼布(nintedanib)衰减VEGF诱导的微血管内皮细胞的增殖。将人原代微血管内皮细胞(MVEC)与指定浓度的尼达尼布(nintedanib)孵育,并使用血管内皮生长因子(VEGF)刺激。磷酸化的Erk1/2(pErk1/2)、总Erk1/2(tErk1/2)和actin通过westernblot进行定量。(A)显示了一个代表性的印迹。(B)显示了在未受刺激的MVEC条件下,pErk1/2/tErk1/2(对照n=5,PAHn=4)的密度定量比值,表示倍数延长。采用单要素方差分析(one-oneANOVA)来确定统计学意义。数据以平均值±SEM表示。采用EdU染色(对照组n=5,PAHn=4)评估VEGF刺激联合0.3个不同浓度的预处置后MVEC的增殖情况,进行比例配对t检验(C)。

  尼达尼布(nintedanib)不影响肺血管重建

  为了评估体内效应,我们从第8周开始给SuHx大鼠使用尼达尼布(nintedanib)医治3周。房车结束后减少舒张压直径尼达尼布(nint
尼达尼布(nintedanib)抑制VEGF诱导的肺MVEC增殖-
edanib)医治(P=0.002),少的趋势房车刚度(速度,P=0.07)和延长肺动脉加速度时间纠正周期长度(非洲锥虫/cl,P=0.07)。心脏重量和Fulton指数(RV/(LV±S))在vehicle和尼达尼布(nintedanib)处置的动物之间无差异。尼达尼布(nintedanib)处置的动物红细胞压积减少(P=0.03)。我们的肺、内膜和内侧壁厚度的组织学分析在vehicle和尼达尼布(nintedanib)医治的动物中没有差异。

  使用vehicle或尼达尼布(nintedanib)医治3周后,对比SuHx大鼠的体重、导管、超声心动图和体外测量的概述。参数数据采用不配对t检验,非参数数据采用Mann-Whitneyu检验。数据以平均值±SEM表示。(vehiclen=9,尼达尼布(nintedanib)n=12)

  dP/dt,压强/时间;速度、舒张倒电容;LV,左心室;PAAT/cl,肺动脉加速时间除以周期长度;右心室;右心室舒张末期内径;右心室收缩压;右心室壁厚度;TPRI,总肺阻力指数;逐渐变小,三尖瓣环状平面收缩偏移。

  在实验中,尼达尼布(nintedanib)不能降低肺血管的重建,而SU5416联合4周缺氧(10%O2)可诱发大鼠肺动脉高压(vehiclen=4,尼达尼布(nintedanib)n=6)。第八周,形成晚后期肺病变时,给大鼠灌胃液或尼达尼布(nintedanib)(50毫克/kg)医治3周(A)。肺血管内膜和内侧壁厚度未发生变化。每只大鼠共测量19-50条血管。数据以平均值±SEM(B)表示。

  尼达尼布(nintedanib)改善SuHx大鼠的RV适应

  通过延长右心室舒张刚度检查到心脏纤维化,被认为是肺动脉高压患病者右心室衰竭的原理之一。由于尼达尼布(nintedanib)对心脏的抗纤维化作用尚不明白,我们评估了尼达尼布(nintedanib)医治是否能降低RV纤维化。动物模型采用微细红染色法测定总胶原蛋白。我们观察到尼达尼布(nintedanib)处置大鼠右心室总胶原蛋白的降低。为了评估胶原沉积情况,我们通过RT-PCR和免疫荧光染色定量测定右心室的I和III型胶原。

  I型胶原在mRNA水平上显著减少。免疫荧光染色观察到较少的III型胶原,但不影响胶原的I/III比例。为了探讨TGF-TGF介导的尼达尼布(nintedanib)在肺动脉高压大鼠右心室的抗纤维化特性,我们量化了RV组织中结缔组织生长因子mRNA的水平。结缔组织生长因子不受尼达尼布(nintedanib)处置的抑制。

  尼达尼布(nintedanib)抑制心肌纤维化、骨桥蛋白-1和肥厚。在右心室,尼达尼布(nintedanib)(对照组n=9条白条,尼达尼布(nintedanib)n=12条灰色条)医治显示I型胶原和骨桥蛋白-1转录水平显著减少4倍。尼达尼布(nintedanib)处置的大鼠右心室的微细红染色显著下降(P=0.02)。免疫荧光染色显示III型胶原在尼达尼布(nintedanib)组中显著下降(P<0.001)。比例条表示100°m(C)。I型胶原蛋白水平未发生变化(每只动物3张RV图)。鳞片提示100°m(D),右心室肥厚较少(P=0.009)。量表条表示150流量表m(E),参数数据采用不配对t检验,非参数数据采用Mann-Whitneyu检验。数据以平均值±SEM(B-E)表示。车辆n=9,尼达尼布(nintedanib)n=12(A-E)。

  尼达尼布(nintedanib)对心肌成纤维细胞纤连蛋白的影响。用尼达尼布(nintedanib)医治两株人心肌成纤维细胞(1个ohM,24h),观察该化合物对纤维连接蛋白产生的影响。两个实验的代表性westernblot结果显示。westernblot检查以Vinculin作为定量对照。致密定量的印迹显示,纤连蛋白,一种纤维化的测量,显著减少尼达尼布(nintedanib)(P=0.002)。配对t检验(n=4)。数据以平均值±SEM表示。尼达尼布(nintedanib)一瓶好多钱?尼达尼布(nintedanib)能够找乱找的不靠谱的渠道吗?如果需要的患病者能够联系[药道网],[药道网]是专业的做海外医疗的,详情请扫码咨询:

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